区分早期凋亡、晚期凋亡、坏死及其他调控性细胞死亡，并通过时间序列和多指标证据建立作用机制。
实验目的
区分早期凋亡、晚期凋亡、坏死及其他调控性细胞死亡，并通过时间序列和多指标证据建立作用机制。
适用范围与实验要求
- 样本：贴壁或悬浮培养细胞
- 样本：原代细胞
- 样本：组织来源单细胞
- 样本：3D 模型需优化解离和成像
- 难度与耗时：中等至高级，约 4–48 小时
- 安全：细胞样本和诱导剂按相应规范处理；流式染料和固定液遵循化学品安全要求。
标准工作流程
- 确定候选死亡机制和时间窗
- 设置剂量、时间和救援条件
- 温和收集全部细胞组分
- 完成 Annexin V/膜完整性或成像检测
- 测定 caspase、线粒体或其他机制标志
- 使用流式或成像定量亚群
- 结合蛋白或基因表达验证通路
- 重复独立实验并进行时间序列解释
设备、试剂与耗材
- 设备：流式细胞仪、荧光显微镜或高内涵成像、微孔板检测仪、细胞培养设备
- 试剂：Annexin V 与膜完整性染料、Caspase 活性试剂、线粒体膜电位探针、通路抑制剂与阳性诱导剂
- 耗材：流式管或微孔板、细胞滤网、避光反应管、低吸附枪头
必需对照与 QC
- 未处理和溶剂对照
- 阳性凋亡对照
- 坏死对照
- 单染和补偿对照
- 通路抑制或救援对照
- 单染和补偿有效；未处理背景低；阳性对照产生预期亚群；采集足够事件；门控固定且可追溯；至少两种独立原理支持结论。
关键参数与结果解释
取样时间、细胞收集完整性、染色顺序、钙离子条件、补偿、门控、阳性对照和救援实验是关键。
Annexin V 阳性并非单独证明凋亡；需结合膜完整性、caspase、形态、时间序列及抑制或救援结果判断死亡类型。
常见问题
背景高时减少机械损伤并快速检测；信号弱时优化诱导时间和染料；亚群分离差时检查补偿和缓冲体系；结论矛盾时增加时间点和正交标志。
产品 BOM 入口
科研用途说明：本流程仅用于科研实验设计和产品选型；具体参数、兼容性、规格、价格和交付以项目评估及正式报价为准。