在二维划痕或 Transwell 模型中定量比较细胞迁移与基质侵袭能力，评估基因、通路或候选化合物对运动表型的影响。
实验目的
在二维划痕或 Transwell 模型中定量比较细胞迁移与基质侵袭能力，评估基因、通路或候选化合物对运动表型的影响。
适用范围与实验要求
- 样本：肿瘤与非肿瘤贴壁细胞
- 样本：原代细胞
- 样本：工程化细胞系
- 样本：经处理或共培养的细胞
- 物种：人、小鼠、大鼠、其他适配细胞模型
- 难度与耗时：中等，约 1–3 天
- 安全：细胞与处理化合物按来源执行安全要求；固定染色试剂与基质材料按说明书操作。
实验原理
划痕实验观察细胞向无细胞区域移动；Transwell 通过多孔膜和趋化梯度测量穿膜细胞，加入基质胶层后用于评估侵袭能力。
标准工作流程
- 确认细胞状态并预设接种密度
- 根据问题选择划痕、迁移或侵袭模式
- 统一建立划痕或基质包被小室
- 设置趋化梯度和处理条件
- 在预设时间采集图像或终点固定
- 去除未迁移细胞并完成染色
- 采用盲法或自动化算法定量面积、距离或细胞数
- 结合活率、增殖和重复结果解释表型
设备、试剂与耗材
- 设备：细胞培养系统、倒置显微镜或高内涵成像仪、细胞计数设备、图像分析软件
- 试剂：细胞培养基与趋化因子、细胞外基质或基质胶、固定与染色试剂、活率或增殖校正试剂
- 耗材：Transwell 小室、细胞培养板、无菌枪头与离心管、成像兼容培养器皿
必需对照与 QC
- 无趋化因子阴性对照
- 已知促迁移或抑制对照
- 未包被膜对照
- 细胞活率/增殖对照
- 时间零点图像
- 时间零点一致；阴性背景可接受；阳性对照方向正确；重复孔变异受控；定量处于未饱和范围；细胞死亡或增殖差异已被监测和校正。
关键参数与结果解释
细胞汇合度、划痕宽度、膜孔径、基质浓度、趋化梯度、孵育时间和增殖速度是关键混杂因素。
迁移、侵袭和增殖是不同表型。结论应基于至少一种活率/增殖校正，并在可能时使用划痕与 Transwell 或活细胞成像进行正交验证。
常见问题与排错
细胞脱落时降低机械应力；划痕不一致时使用标准化工具；背景穿膜过高时缩短孵育或降低细胞数；基质批次差异大时固定浓度、批次和预包被流程。
产品 BOM 入口
科研用途说明：本流程仅用于科研实验设计和产品选型；具体参数、兼容性、规格、价格和交付以项目评估及正式报价为准。