设计并实施基因敲除、定点编辑或调控实验，建立具有基因型、蛋白和功能证据的工程化细胞模型。
实验目的
设计并实施基因敲除、定点编辑或调控实验，建立具有基因型、蛋白和功能证据的工程化细胞模型。
适用范围与实验要求
- 样本：永生化细胞系
- 样本：原代细胞
- 样本：干细胞和类器官
- 样本：其他经评估的体外模型
- 难度与耗时：高级，约 2–8 周
- 安全：遵守重组 DNA、病毒载体和细胞材料相关审批与生物安全规范；编辑细胞仅用于获批的科研用途。
标准工作流程
- 确认编辑目标和功能终点
- 设计并预筛多条向导 RNA
- 优化细胞状态和递送条件
- 实施编辑并设置完整对照
- 在合适时间检测编辑效率
- 分离单克隆或富集目标群体
- 完成基因型、转录和蛋白验证
- 使用独立克隆和救援实验验证表型
设备、试剂与耗材
- 设备：细胞培养系统、电转或其他递送设备、PCR 与测序设备、单细胞克隆和成像设备
- 试剂：Cas 蛋白、mRNA 或表达载体、sgRNA 或 crRNA:tracrRNA、供体模板（按需）、转染与细胞培养试剂、基因型和蛋白检测试剂
- 耗材：培养板和克隆耗材、低吸附核酸管、PCR 管板和枪头、单细胞分选或稀释耗材
必需对照与 QC
- 未处理细胞
- 非靶向向导对照
- 阳性编辑对照
- 多个独立克隆
- 潜在脱靶位点检查
- 对照表现符合预期；目标位点编辑经测序确认；单克隆身份、活率和支原体合格；至少两种层面验证功能；关键结论由独立克隆或救援实验支持。
关键参数与结果解释
向导序列和特异性、递送方式、细胞状态、Cas 与向导比例、供体设计、筛选压力和克隆扩增条件决定编辑效率与可解释性。
编辑率不等于功能敲除。需结合等位基因组成、转录本、蛋白表达、细胞表型和潜在脱靶影响解释结果。
常见问题
编辑低时重新设计向导并优化递送；活率低时降低剂量或调整恢复条件；克隆难扩增时优化培养和分选；表型不一致时检查嵌合、补偿通路和脱靶。
产品 BOM 入口
科研用途说明：本流程仅用于科研实验设计和产品选型；具体参数、兼容性、规格、价格和交付以项目评估及正式报价为准。