DNA 提取、纯化与质量控制全流程

从细胞、组织、血液、微生物或反应体系中获得满足 PCR、克隆、测序和定量分析要求的高质量 DNA。

实验目的

从细胞、组织、血液、微生物或反应体系中获得满足 PCR、克隆、测序和定量分析要求的高质量 DNA。

适用范围与实验要求

  • 样本：培养细胞和动物组织
  • 样本：全血、血凝块和体液
  • 样本：细菌、酵母和环境样本
  • 样本：质粒培养物与 PCR 产物
  • 难度与耗时：基础至中等，约 45 分钟至 4 小时
  • 安全：样本按来源执行相应生物安全规范；裂解液、有机溶剂和酒精在通风及个人防护条件下使用。

标准工作流程

  1. 规范采集并记录样本量
  2. 充分裂解并去除蛋白
  3. 按体系完成 DNA 结合
  4. 充分洗涤并去除残余乙醇
  5. 使用低盐缓冲液或无核酸酶水洗脱
  6. 测定浓度、纯度和完整性
  7. 以小体积下游反应确认可扩增性

设备、试剂与耗材

  • 设备：微量离心机、恒温金属浴或水浴、移液器、核酸定量与电泳设备
  • 试剂：裂解液和蛋白酶 K、DNA 结合、洗涤和洗脱缓冲液、RNase（按需）、核酸标准品与质控试剂
  • 耗材：硅胶柱或磁珠、无核酸酶离心管和枪头、样本研磨或均质耗材、核酸保存管

必需对照与 QC

  • 提取空白
  • 已知阳性样本
  • 过程对照
  • 下游扩增对照
  • 提取空白无可检出污染；浓度满足下游投入；A260/280 与 A260/230 在预设范围；凝胶或片段分析显示完整性符合用途；过程对照可正常扩增。

关键参数与结果解释

样本输入量、裂解充分度、结合体系容量、洗涤次数、残余乙醇、洗脱体积和温度决定最终产量与纯度。

结合得率、纯度比值、完整性和下游扩增表现综合判断。高浓度不等于高质量，抑制物残留可能导致 PCR 或酶切失败。

常见问题

得率低时增加裂解和洗脱效率；纯度低时加强洗涤或降低输入；DNA 降解时减少剪切、冻融和核酸酶暴露；下游受抑制时稀释或二次纯化。

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科研用途说明：本流程仅用于科研实验设计和产品选型；具体参数、兼容性、规格、价格和交付以项目评估及正式报价为准。