覆盖样本与量程评估、板图设计、标准曲线、加样孵育、洗板显色、读板、拟合和结果审核的完整 ELISA 工作流。
实验目的
对血清、血浆、培养上清和裂解液中的目标蛋白进行定性或定量检测，支持浓度比较和批次分析。
适用范围与实验要求
- 样本：血清、血浆、培养上清、组织或细胞裂解液和经验证的其他体液
- 要求：确认目标分析物、物种、样本基质、预计浓度、所需量程和灵敏度
- 耗时：通常 3–6 小时
- 安全：生物样本按潜在危害材料处理；腐蚀性终止液使用个人防护
标准工作流程
- 平衡试剂并规划标准、空白、质控和重复孔
- 准确配制标准曲线和适当稀释的样本
- 按统一顺序加样并严格控制孵育时间
- 充分洗板并避免孔底残液
- 加入检测抗体、酶标结合物和显色底物
- 在统一时间终止反应并读板
- 使用 4PL、5PL 或已验证模型拟合标准曲线
- 审核重复孔 CV、质控和有效量程
设备、试剂与耗材
- 设备：酶标仪、洗板机或手动洗板装置、恒温孵育设备和多道移液器
- 试剂：预包被板或捕获抗体、检测抗体、酶标结合物、标准品、稀释液、洗涤液、底物和终止液
- 耗材：酶标板、封板膜、试剂槽、低吸附离心管和枪头
必需对照与 QC
- 完整标准曲线、试剂空白、阴性对照、阳性或质控样本及重复孔
- 方法验证时评估加标回收、稀释线性、检测限、定量限和板内板间精密度
- 标准曲线覆盖样本；超量程样本重新稀释；重复孔 CV 达到预设标准
常见问题
标准曲线差时核对复溶、稀释和混匀；背景高时增加洗板并减少残液；重复差时校准移液器并统一计时；样本无信号时调整稀释倍数并核对基质和量程。
产品选型入口
科研用途说明：所有推荐均按科研用途编写，不替代针对具体样本的验证。