建立可自动化、可量化且具有足够动态范围的细胞或生化检测体系，完成化合物初筛、命中确认、剂量反应和反筛。
实验目的
建立可自动化、可量化且具有足够动态范围的细胞或生化检测体系，完成化合物初筛、命中确认、剂量反应和反筛。
适用范围与实验要求
- 样本：稳定细胞系与原代细胞
- 样本：重组蛋白或酶体系
- 样本：报告基因细胞模型
- 样本：化合物库与机制对照物
- 物种：不限，取决于靶点和模型来源
- 难度与耗时：高级，约 1–4 周，取决于规模与验证层级
- 安全：化合物按危害信息与溶剂要求管理；细胞、蛋白和自动化设备按实验室安全流程操作；废液分类处置。
实验原理
在微孔板中以标准化体系测量化合物对目标酶、受体、报告信号或细胞表型的影响，通过阳性/阴性对照计算动态范围与 Z 因子，并对候选命中进行复测、浓度梯度和正交验证。
标准工作流程
- 定义主要终点、命中阈值和反筛策略
- 优化试剂浓度、细胞密度与反应时间
- 通过小规模板验证动态范围和 Z 因子
- 执行化合物初筛并监测板位效应
- 复测初筛命中并排除信号干扰
- 建立浓度梯度并拟合剂量反应
- 使用正交实验和细胞毒性反筛
- 整理命中优先级、结构信息和复现证据
设备、试剂与耗材
- 设备：自动化液体处理平台、多模式微孔板检测仪、细胞培养与计数设备、数据分析和板位追踪系统
- 试剂：化合物库与机制对照、细胞培养或生化反应体系、活率、荧光或发光检测试剂、目标蛋白、底物和辅因子（按需）
- 耗材：高质量微孔板、储液板与封板膜、低吸附枪头、化合物兼容耗材
必需对照与 QC
- 最大信号对照
- 最小信号或已知抑制剂对照
- 溶剂对照
- 无细胞/无酶背景
- 板内质量控制样本
- 板级 Z 因子和对照窗口达到预设；关键对照趋势稳定；重复孔和跨板变异受控；命中在独立复测中重现；剂量反应曲线满足拟合和效力标准。
关键参数与结果解释
Z 因子、信噪比、DMSO 耐受、加样精度、边缘效应、孵育时间、化合物溶解度和检测干扰决定筛选可靠性。
初筛命中仅代表在特定条件下改变读出。需排除荧光/发光干扰、聚集、溶解度、非特异毒性和靶点无关效应，并通过正交与机制实验确认。
常见问题与排错
板间漂移时校准液体处理和读板时序；边缘效应高时优化加湿与孵育；命中不复现时检查化合物身份和溶解度；假阳性多时增加干扰检测和无细胞反筛。
产品 BOM 入口
科研用途说明：本流程仅用于科研实验设计和产品选型；具体参数、兼容性、规格、价格和交付以项目评估及正式报价为准。