覆盖 FFPE 或冰冻组织切片处理、抗原修复、抗体染色、显色复染、封片、扫描和科研病理定量的完整方案。
实验目的
在组织形态背景中检测特定抗原的表达位置、染色强度和阳性细胞分布，用于科研病理和组织标志物研究。
适用范围与实验要求
- 样本：FFPE 组织、冰冻组织、细胞蜡块和组织芯片
- 要求：明确固定液、固定时间、切片厚度、抗原定位和预期阳性组织
- 耗时：通常 1–2 天；复杂优化需独立预实验
- 安全：人源或动物源组织及二甲苯、甲醛和色原按机构规范处理
标准工作流程
- 烤片、脱蜡和梯度复水
- 根据抗原选择热修复或酶修复
- 阻断内源酶活性与非特异结合
- 孵育 IHC 验证一抗
- 加入二步或聚合物检测系统
- 控制 DAB 或其他色原的显色终点
- 复染、脱水、透明和封片
- 盲法评分或数字病理定量
设备、试剂与耗材
- 设备：烤片与抗原修复设备、湿盒、明场显微镜或全片扫描仪
- 试剂：脱蜡复水、修复缓冲液、酶封闭液、封闭液、IHC 一抗、检测系统、色原和复染液
- 耗材：防脱载玻片、盖玻片、染色缸、疏水圈笔和封片剂
必需对照与 QC
- 已知阳性组织、已知阴性组织、无一抗对照、适用时的同型对照及批次内对照切片
- 组织形态完整，阳性对照定位和强度符合预期，阴性对照无特异显色
- 同批样本处理一致，使用预先定义的强度、比例或 H-score 规则
常见问题
无信号时核对抗体适用性并优化修复；背景高时缩短显色并加强封闭洗涤；边缘效应时避免切片干燥；组织脱片时使用防脱载玻片并降低修复强度。
产品选型入口
科研用途说明：本流程仅用于科研，不构成临床病理诊断或治疗建议。