哺乳动物细胞培养与日常维护全流程方案

覆盖培养体系选择、细胞复苏、接种、换液、传代、计数、冻存、污染监测和质量记录的一站式实验框架。

实验目的

在受控、无菌和可追溯条件下维持哺乳动物细胞的活力、增殖能力和预期表型,为转染、药效、蛋白表达、成像及组学实验提供稳定起始材料。

适用范围

  • 细胞:贴壁细胞系、悬浮细胞系、原代细胞;干细胞和类器官需专用体系
  • 物种:人、小鼠、大鼠及其他哺乳动物
  • 单次换液或传代通常约 30–90 分钟

标准工作流程

  1. 根据细胞特性选择培养基、添加物和培养表面
  2. 在适宜条件下复苏并接种细胞
  3. 每日观察形态、密度和污染迹象
  4. 按细胞需求换液并在合适密度传代
  5. 完成细胞计数和活率评估
  6. 建立主细胞库与工作细胞库
  7. 定期进行支原体检测、身份鉴定和批次记录

必需物料

设备

  • II 级生物安全柜和 CO₂ 培养箱
  • 倒置显微镜、低速离心机和细胞计数设备
  • 水浴锅及液氮或低温储存系统

试剂

  • 基础培养基、血清或无血清添加物
  • PBS、细胞消化液和冻存液
  • 支原体检测试剂

耗材

  • 培养瓶、培养皿或培养板
  • 无菌移液管、枪头、离心管和冻存管

必需对照与 QC

  • 未处理对照、参考细胞和空白培养基污染对照
  • 形态、活率和增殖速度符合实验室标准
  • 无细菌、真菌和支原体污染,关键细胞完成身份鉴定

常见问题

贴壁差时检查培养表面、培养基和消化强度;活率低时优化复苏、消化和离心条件;生长慢时检查接种密度、培养基批次、气体环境和代次;疑似污染时立即隔离并检测。

按物料角色选购

说明:具体商品 BOM 将在真实商品入库并完成细胞适配、无菌和规格审核后补充。