从细胞、组织和生物样本中获得适用于逆转录、RT-qPCR、RNA-seq 和杂交分析的高质量 RNA。
实验目的
从细胞、组织和生物样本中获得适用于逆转录、RT-qPCR、RNA-seq 和杂交分析的高质量 RNA。
适用范围与实验要求
- 样本：培养细胞
- 样本：新鲜或冻存组织
- 样本：血液和体液
- 样本：植物、微生物及低丰度样本
- 难度与耗时：中等，约 1–3 小时
- 安全：全程执行 RNase 控制；样本按来源进行生物安全管理；强变性剂和有机溶剂按化学品规范使用。
标准工作流程
- 快速稳定或冻存样本
- 充分均质并完成强变性裂解
- 分离并结合 RNA
- 执行柱上或溶液 DNase 处理
- 充分洗涤并干燥膜或磁珠
- 低体积洗脱并冰上操作
- 测定浓度、纯度和完整性
- 分装并低温保存
设备、试剂与耗材
- 设备：生物安全柜或洁净操作区、微量离心机、组织均质设备、核酸定量和片段分析设备
- 试剂：RNA 裂解与变性液、还原剂和 RNase 抑制剂、结合、洗涤与洗脱液、DNase 及反应缓冲液
- 耗材：RNase-free 柱或磁珠、无 RNase 离心管和滤芯枪头、一次性研磨耗材、低吸附保存管
必需对照与 QC
- 提取空白
- RNA 阳性过程对照
- -RT 对照
- 外源 spike-in（按需）
- 提取空白与 -RT 对照阴性；浓度和纯度满足用途；RIN、片段分布或电泳完整性达到预设标准；RT-qPCR 内参重复性可接受。
关键参数与结果解释
样本离体时间、稳定方式、均质效率、RNase 控制、DNase 处理、洗脱体积和冻融次数是关键变量。
RNA 质量应结合纯度、完整性、基因组 DNA 残留和实际逆转录扩增表现判断；不同样本的可接受阈值需按方法定义。
常见问题
降解时缩短处理时间并强化 RNase 控制；得率低时改善均质或匹配输入量；DNA 残留时优化 DNase；下游抑制时增加洗涤或二次纯化。
产品 BOM 入口
科研用途说明：本流程仅用于科研实验设计和产品选型；具体参数、兼容性、规格、价格和交付以项目评估及正式报价为准。