覆盖样本保存、RNA 提取、去除基因组 DNA、质量评估、逆转录、实时定量 PCR 和结果分析的完整实验框架。
实验目的
对细胞、组织等样本中目标 RNA 的相对或绝对丰度进行定量，用于基因表达、处理响应和生物标志物验证。
适用范围
- 样本：培养细胞、新鲜或冻存组织、血液、FFPE、体液或纯化 RNA
- 物种：取决于引物和探针设计
- 难度与耗时：中等，通常约 4–8 小时
标准工作流程
- 确定样本、目标基因和定量策略
- 提取总 RNA 并去除基因组 DNA
- 评估 RNA 浓度、纯度和完整性
- 统一 RNA 投入量并完成逆转录
- 配制 qPCR 体系并加入所有对照
- 检查扩增曲线、熔解曲线和扩增效率
- 完成归一化、统计和结果报告
必需物料
设备
- 实时荧光定量 PCR 仪
- 核酸定量仪、微量离心机和移液器
- 分区使用的 PCR 操作台
试剂
- RNA 提取、DNase 和逆转录试剂
- qPCR 预混液、引物或探针
- 无核酸酶水和必要的标准品
耗材
- 无 RNA 酶离心管和枪头
- 光学 qPCR 管、孔板和封板膜
必需对照与 QC
- 无模板对照 NTC、无逆转录对照 -RT、阳性对照和稳定内参
- 技术重复 Ct 值一致，染料法熔解曲线为单一主峰
- 扩增效率和标准曲线线性达到实验室预设范围
常见问题
无扩增时检查 RNA/cDNA 质量、引物和反应组分；重复差异大时改善移液、混匀和气泡控制；NTC 阳性时更换试剂并进行分区清洁。
按物料角色选购
说明：具体商品 BOM 将在真实商品入库并完成扩增效率、仪器兼容性和规格审核后补充。