从样本裂解、蛋白定量、SDS-PAGE 和转膜，到抗体孵育、信号采集和数据分析的一站式实验框架。
实验目的
检测复杂样本中特定蛋白的表达量、分子量及相对变化，并可结合修饰特异性抗体研究蛋白活化状态。
适用范围
- 样本：细胞裂解液、组织裂解液、纯化蛋白及经过适配的体液样本
- 物种：人、小鼠、大鼠；其他物种需核对抗体反应性
- 难度与耗时：中等，通常约 1–2 天
标准工作流程
- 裂解、澄清并定量蛋白
- 统一上样量后进行 SDS-PAGE
- 选择 PVDF 或 NC 膜并完成转膜
- 封闭并孵育一抗
- 洗膜后孵育标记二抗
- 化学发光或荧光成像
- 在线性范围内进行归一化和统计分析
必需物料
设备
- 凝胶电泳与转膜系统
- 摇床和成像系统
- 蛋白定量仪器
试剂
- 裂解液及蛋白酶/磷酸酶抑制剂
- 蛋白定量试剂、凝胶和分子量标准
- 转膜、封闭和洗膜体系
- 一抗、二抗及检测试剂
耗材
- PVDF 或 NC 膜
- 离心管、枪头、孵育盒和防护用品
必需对照与 QC
- 阳性对照、阴性或敲除对照、上样内参和二抗空白
- 膜转移均匀，目标条带位于预期分子量附近
- 用于定量的信号不得饱和
常见问题
无条带时检查样本完整性、转膜、抗体反应性和曝光设置；背景高时优化抗体浓度、封闭和洗膜条件；条带拖尾时减少上样量并确认样本充分变性。
按物料角色选购
说明：具体商品 BOM 将在真实商品入库并完成抗体反应性、设备兼容性和规格审核后补充。